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Rat TNF-α ELISA Kit
  • 产品货号:
    DE5201
  • 中文名称:
    Rat TNF-α ELISA Kit
  • 英文名称:
    Rat TNF-α ELISA Kit
  • 品牌:
    BIODEE
  • 货号

    产品规格

    售价

    备注

  • DE5201-96T

    96T

    ¥1980.00

    Elisa试剂盒

产品描述

产品编号: DE5201
规格: 96T
检测范围: 31.2pg/ml-2000pg/ml
特异性: 特异检测大鼠 TNF-α
灵敏度: <31.2pg/ml
储存条件: 2-8℃(频繁使用时)或者-20℃(长期不使用时)
保质期: 6 个月(2-8℃), 12 个月(-20℃)
用途: 用于定量分析大鼠血清、血浆或细胞培养上清中 TNF-α 浓度
产品简介
肿瘤坏死因子-α(Tumor necrosis factor-α, TNF-α) 是一种多功能细胞因子,在体内免疫反应调节中
起重要作用。主要由单核/巨噬细胞、淋巴细胞、纤维母细胞、肝细胞、小胶质细胞、血管内皮细胞等细
胞产生。在生理条件下, TNF-α 的合成受多种细胞因子、核分裂因子和抗原的刺激而增加。各种免疫调节
相关通路的激动剂或抑制剂也可以对 TNF-α 的表达和分泌发挥重要调节作用。
拜尔迪提供的 Rat TNF-α ELISA Kit 是典型的双抗夹心法酶联免疫吸附测定试剂盒(Enzyme-linked
Immunosorbent Assay, ELISA)。样品加入测定孔中, TNF-α 被特异性吸附到预先包被的单克隆抗体上,然
后针对其它表位的生物素标记的检测抗体再特异性结合到 TNF-α 上,辣根过氧化物酶标记的链霉亲和素再
特异性结合到生物素上,最后经 TMB 底物显色,即可通过标准曲线和样品吸光度对 TNF-α 浓度进行定量。
试剂盒组成

Components Size
Rat TNF-α Standard 10ng
Rat TNF-α Capture Antibody Coated Plate 96Wells
Rat TNF-α Detection Antibody(100×) 125μl
HRP-Streptavidin(100×) 125μl
Sample Diluent Solution 30ml
Detection Antibody Diluent Solution 12ml
HRP-Streptavidin Diluent Solution 12ml
TMB Solution 12ml
Stop Solution 12ml
Wash Buffer(20×) 25ml

需要而未提供的试剂和器材
1. 去离子水
2. 系列可调节移液器及吸头
3. 干净的试管或离心管
4. 酶标仪
样品的准备
1. 培养细胞上清:贴壁细胞直接取细胞培养基分析即可;悬浮细胞可以 300×g 离心除去沉淀; 分析细胞
裂解物,需加入裂解液后 10000×g 离心取上清。
2. 血浆:采用 EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝,抽血后 30 分钟内 1000×g 离心取上清。
3. 血清:用干净试管或离心管收集血液,室温凝固 1 小时, 2000×g 离心取上清。
4. 标本立即分析或-20℃及以下温度保存。
试剂的准备
1. 大鼠 TNF-α 标准品(Rat TNF-α Standard)配制: 在使用前 10 分钟配制, 加入 1ml 样品稀释液(Sample
Diluent Solution) 到标准品管中,将 TNF-α 标准品配制为 10ng/ml,然后吸取部分标准品依次将标准品
稀释为 2000pg/ml、 1000pg/ml、 500pg/ml、 250pg/ml、 125pg/ml、 62.5pg/ml、 31.2pg/ml。 剩余 10ng/ml
标准品请-20℃保存。
2. 生物素标记的大鼠 TNF-α 检测抗体(Rat TNF-α Detection Antibody) 工作液配制:在使用前 10 分钟配
制,利用检测抗体稀释液(Detection Antibody Diluent Solution) 将生物素标记的大鼠 TNF-α 检测抗体
稀释 100 倍。
3. 辣根过氧化物酶标记的链霉亲和素(HRP-Streptavidin) 工作液配制:在使用前 10 分钟配制,利用辣根
过氧化物酶标记的链霉亲和素稀释液 HRP-Streptavidin Diluent Solution) 将辣根过氧化物酶标记的链霉
亲和素稀释 100 倍。
4. 洗涤液(Wash Buffer)的工作液配制:利用去离子水将洗涤液稀释 20 倍。
测定方法
1. 取出酶标板(Rat TNF-α Capture Antibody Coated Plate),设置空白调零孔、标准曲线孔和样品孔。
2. 在空白调零孔中加入样品稀释液,在标准曲线孔中加入系列浓度标准品,在样品孔中加入正确稀释后
的样品,体积均为 100μl; 37℃孵育 1 小时。
3. 各孔加入 300μl 洗涤液清洗酶标板,然后利用吸水纸吸干或甩干,重复 3 次。
4. 各孔加入 100μl 生物素标记检测抗体工作液, 37℃孵育 1 小时。
5. 各孔加入 300μl 洗涤液清洗酶标板,然后利用吸水纸吸干或甩干,重复 3 次。
6. 各孔加入 100μl 辣根过氧化物酶标记的链霉亲和素工作液, 37℃孵育 30 分钟。
7. 各孔加入 300μl 洗涤液清洗酶标板,然后利用吸水纸吸干或甩干,重复 4 次。
8. 各孔加入 100μl TMB 反应液(TMB Solution), 37℃孵育 10-20 分钟。
9. 各孔加入 100μl 的终止液(Stop Solution)终止反应。
10. 酶标仪测定 450nm 波长的吸光度。
数据处理
利用标准品浓度为横坐标, OD 值为纵坐标制作标准曲线,并获得横纵坐标之间的函数关系式。然后
利用各样品的 OD 值计算样品的 TNF-α 浓度。
注意事项
1. 用户在初次使用试剂盒时,应将小体积试剂离心数分钟,以便试剂集中到管底。
2. 要严格避免操作过程中酶标板干燥,干燥会使酶标板上生物成份失活和下一步非特异反应强度加大。
3. 使用前 TMB 显色液为无色透明溶液,若发现颜色异常,请及时与厂家联系。
4. 为避免交叉污染,请勿重复使用移液器吸头。
5. 禁止混用不同批次试剂盒内的试剂和酶标板。
6. 每次实验剩余的酶标板条,应压紧铝箔袋密封条密封保存。
7. 测定未知 TNF-α 浓度范围样品时,应先利用少量酶标板条和加入不同稀释倍数样品及 2000pg/ml 标准
品来评估样品 TNF-α 浓度范围,然后再进行批量测定正确稀释后的样品。
8. 本试剂盒仅用于科学研究,不得用于诊断和医疗。