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百瑞极干货|一文讲透CCK-8实验原理和使用方法

药物筛选、细胞毒性测定,肿瘤药敏试验等细胞生物学与药理学研究中,细胞增殖能力的评估是一项基础而重要的实验工作。在众多检测方法中,CCK-8法凭借操作简便、灵敏度高、结果可靠等优势,已成为实验室最受欢迎的细胞增殖和细胞毒性检测手段之一。

Cell Counting Kit-8(CCK-8)
实验原理

WST-8(化学名:2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑单钠盐),在电子耦合试剂存在的情况下,可以被线粒体内的脱氢酶还原生成高度水溶性的橙黄色的甲臜产物(formazan)。颜色的深浅与细胞的增殖成正比,与细胞毒性成反比。使用酶标仪在450nm波长处测定OD值,间接反映活细胞数量。

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优势

WST-8 是MTT的一种升级替代产品,和MTT或其它 MTT类似产品如XTT、MTS等相比有明显的优点。

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应用

  • 药物筛选

  • 细胞增殖测定

  • 细胞毒性测定

  • 肿瘤药敏试验

  • 生物因子的活性检测


使用方法

我们以百瑞极CCK-8试剂盒(货号:BN15201)为例,来了解下CCK-8在细胞毒性检测以及细胞增殖-毒性检测的使用方法。


 细胞活性检测

  1. 在 96 孔板中接种细胞悬液(100 μL / 孔)。将培养板放在培养箱中预培养(37℃, 5% CO₂)。

  2. 向每孔加入 10 μL CCK 溶液(注意不要在孔中生成气泡,它们会影响 OD 值的读数)。

  3. 将培养板在培养箱内孵育 1-4 h。

  4. 用酶标仪测定在 450 nm 处的吸光度。

  5. 若暂时不测定 OD 值,可以向每孔中加入 10 μL 0.1 M 的 HCl 溶液或者 1% w/v SDS 溶液,并遮盖培养板避光保存在室温条件下。24 h 内测定,吸光度不会发生变化。


细胞增殖-毒性检测

  1. 在 96 孔板中配置 100 μL 的细胞悬液(通常细胞增殖实验每孔加入 100 μL 2000 个细胞,细胞毒性实验每孔加入 100 μL 5000 个细胞。具体每孔所用的细胞的数目,需根据细胞的大小,细胞增殖速度的快慢等因素决定)。按照实验需要,进行培养(在 37℃,5% CO₂,的条件下)预培养 24 小时。

  2. 向培养板加入 1-10 μL 不同浓度的待测物质。

  3. 将培养板在培养箱孵育一段适当的时间(例如:6、12、24 或 48 h)。

  4. 向每孔加入 10 μL CCK 溶液(注意不要在孔中生成气泡,它们会影响 OD 值的读数)。

  5. 在细胞培养箱内继续孵育 1-4 小时,对于大多数情况孵育 1 小时就可以了。时间的长短根据细胞的类型和细胞的密度等实验情况而定,初次实验时可以在 0.5、1、2 和 4 小时分别用酶标仪检测,然后选取吸光度范围比较适宜的一个时间点用于后续实验。

  6. 用酶标仪测定在 450 nm 处的吸光度。


产品推荐

百瑞极CCK-8试剂盒

Cell Counting Kit-8(CCK-8)试剂盒

品牌:百瑞极Biorigin

货号:BN15201

规格:500T;2x500T;6x500T;20x500T


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