逸漠新品推荐丨hPSC诱导分化胰岛β细胞试剂盒

产品介绍

hPSC诱导分化胰岛β细胞是目前最有希望根治I型糖尿病的细胞疗法体系，通过分步通路调控模拟胰腺胚胎发育，体外批量制备具备葡萄糖应答的胰岛素分泌细胞。目前分化工艺已成熟进入临床转化，但仍存在细胞成熟、免疫排斥、规模化生产等核心挑战；伴随小分子成熟诱导、封装材料、基因编辑技术迭代，未来有望实现标准化、可普及的糖尿病细胞治愈方案。

秉承“从干细胞到功能单元”的核心技术理念，逸漠生物推出的hPSC诱导分化胰岛β细胞试剂盒，采用化学成分明确的分阶段诱导体系，通过精确模拟胰岛发育过程中的关键信号通路调控，能够高效地将hPSCs定向诱导为表达INS、C-peptide和NKX6.1等关键标志物的胰岛β细胞。该试剂盒为糖尿病机制研究、药物筛选及细胞治疗开发提供了标准化、可重复且功能可靠的模型，助力科研人员加速相关领域的科学发现与临床转化。

1. 定向分化与专业性

采用六阶段精准诱导策略（内胚层诱导→肠管内胚层→胰腺内胚层→胰腺祖细胞→内分泌祖细胞→胰岛β细胞），模拟体内胰岛发育过程，高效获得共表达关键标志物INS、C-peptide和NKX6.1的胰岛β细胞。

2. 标准化与操作便捷性

提供化学成分明确、无血清的完整培养体系，所有组分预优化并清晰分装，将复杂的分化流程简化为易于操作的标准化步骤，确保不同细胞系、不同批次实验的高可重复性。

3. 广泛的适用性与应用指导

适用于多种人ES和iPS细胞系，与主流干细胞培养体系兼容。分化得到的胰岛β细胞可模拟天然胰岛血糖调节功能，疾病建模与药物筛选。

诱导分化流程

DAY 0-4:第一阶段

(1) 基质胶在4℃下解冻，与DMEM/F12均匀混合（基质胶:DMEM/F12=1:100），铺板，备用。

(2) DAY -1: 当hESC的汇合度达到75%-85%，吸去培养基，用2mL 1x室温PBS（不含Ca2+/Mg2+)清洗hESC，吸去PBS。

(3) 加入1mL含Y-27632（10 μM）的室温Accutase，转移到37℃ 5% CO2细胞培养箱中3-5min，使其解离成单细胞。

(4) 3-5min后，将干细胞传代培养基以等体积直接加入Accutase中，并使用P-1000吸头轻轻上下吹打细胞，制成单细胞悬液，将细胞单悬液收集到15mL离心管中，室温下300 g离心5 min。

(5) 从基质胶包被的板中小心地抽吸包被液而不损坏基质胶涂层表面。

(6) 离心结束，充分去除上清，将1 mL预热的hESC/iPSC 完全培养基（含10μM Y-27632）重悬细胞，轻轻地上下移液以确保单细胞溶液均匀。

(7) 按0.313-0.521×10⁶个细胞/cm2比例将细胞接种到步骤1制备的基质胶包被的板上，在6孔板中每孔最终体积为2 mL（含10μM Y-27632），将孔板转移到37℃、5%CO2细胞培养箱中孵育24h。

(8) DAY 0: 24h后吸去培养基（密度应为100%），并加入2mL 诱导培养基S1a（成分为：基础培养基1-2，1×补充剂S1a）培养24h。

(9) DAY 1: 24h后吸去培养基，使用诱导培养基S1b（成分为：基础培养基1-2，1×补充剂S1b）换液，直到第4天，期间根据培养基颜色每天或隔天换液。

DAY 4-7:第二阶段

(1) DAY 4：第4天，从培养物中抽吸培养基，在6孔板中每孔用2 mL 1×室温PBS（不含Ca2+/Mg2+)清洗培养物，然后从孔中移除PBS。使用2mL预热的诱导培养基S2（成分为：基础培养基1-2，1×补充剂S2）换液。

(2) 根据培养基颜色每天或隔天使用诱导培养基S2换液，直到第7天。

DAY 7-10:第三阶段

(1) DAY 7: 第7天，从培养物中抽吸培养基，在6孔板中每孔用2 mL1×室温PBS（不含Ca2+/Mg2+)清洗培养物，吸去PBS。使用2mL预热的诱导培养基S3（成分为：基础培养基3-4，1×补充剂S3）换液。

(2) 根据培养基颜色每天或隔天使用诱导培养基S3换液，直到第10天。

DAY 10-14: 第四阶段

(1) DAY 10: 第10天，从培养物中抽吸培养基，在6孔板中每孔用2 mL1×室温PBS（不含Ca2+/Mg2+)清洗培养物，吸去PBS。使用2mL预热的诱导培养基S4（成分为：基础培养基3-4，1×补充剂S4）换液。

(2) 根据培养基颜色每天或隔天使用诱导培养基S4换液，直到第14天。

DAY 14-21: 第五阶段

(1) DAY 14: 第14天，从培养物中抽吸培养基，在6孔板中每孔用2 mL1×室温PBS（不含Ca2+/Mg2+)清洗培养物，吸去PBS。使用2mL预热的诱导培养基S5a（成分为：基础培养基5，1×补充剂S5a）换液，培养24h。

(2) DAY 15: 第15天，从培养物中抽吸培养基，在6孔板中每孔用2 mL1×室温PBS（不含Ca2+/Mg2+)清洗培养物，吸去PBS。使用2mL预热的诱导培养基S5b（成分为：基础培养基5，1×补充剂S5b）换液，根据培养基颜色每天或隔天使用诱导培养基S5b换液，直到第21天。

DAY 21-28: 第六阶段

(1) DAY 21: 第21天，从培养物中抽吸培养基，在6孔板中每孔用2 mL1×室温PBS（不含Ca2+/Mg2+)清洗培养物，吸去PBS。使用2mL预热的诱导培养基S6（成分为：基础培养基6，1×补充剂S6）换液，根据培养基颜色每天或隔天使用诱导培养基S6换液，直到第28天。

(2) DAY 28: 第28天，从培养物中抽吸培养基，在6孔板中每孔用2 mL 1×室温PBS（不含Ca2+/Mg2+)清洗培养物，吸去PBS。每孔加入1mL的室温Tryple，将培养物置于37℃ 5%CO2细胞培养箱中孵育3-5 min。

(3) 3-5min后每孔加入1mL DMEM中止消化，轻轻吹打细胞，使细胞脱离孔底。

(4) 将细胞悬液收集到15 mL离心管中，室温下300 g离心3 min。

(5) 仔细抽吸上清液，不干扰细胞，用1mL恢复室温的诱导培养基S6重悬细胞，轻轻地上下移液以确保单细胞溶液均匀，可按1：2比例接种于低吸附六孔板中，每孔使用诱导培养基S6补齐至2mL，可继续维持培养至少7天。

(6) 可取第28天或成球生长的细胞检测胰岛β细胞特异性标志物（如 INS、C-peptide、NKX6.1等）。

免疫荧光检测

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