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Annexin V-PE
  • 产品货号:
    BN16065
  • 中文名称:
    Annexin V-PE
  • 英文名称:
    Annexin V-PE
  • 品牌:
    Biorigin
  • 货号

    产品规格

    售价

    备注

  • BN16065-1mL

    1mL

    ¥3536.00

产品描述

产品规格:1mL(200T) 

储存条件:4℃避光冷藏,请勿冻存。本产品在推荐条件下可以储存 6 个月。

光谱特性:Annexin V-PE: Ex/Em = 488/578 nm

产品介绍 

细胞凋亡早期改变发生在细胞膜表面,这些细胞膜表面的改变之一是磷脂酰丝氨酸( PS )从细胞膜内转移到细胞膜外,使PS 暴露在细胞膜外表面。Annexin V 具有易于结合 到磷脂类如PS 的特性,对PS 有高度的亲和性。因此,该蛋白可充当一敏感的探针检测暴露在细胞膜表面的PS。 

Annexin V-PE 可以与7-AAD/PI等联合使用,来检测细 胞凋亡情况。7-AAD/PI 可被排除在活细胞和早期凋亡细胞之外,而晚期凋亡细胞和坏死细胞可以同时被Annexin V-PE 和7-AAD结合染色呈现双阳性,从而来区分活细胞、早调细胞与晚凋细胞。

使用方法 

1. 根据实验要求诱导细胞凋亡。检测样品中应包含未经处理的细胞样品,作为阴性对照。此外,设定一组样品做单染,用于调节补偿。 

2. 沉淀细胞 悬浮细胞:1000 rpm,4 ℃离心 5 min 沉淀细胞;贴壁细胞:用不含 EDTA 的胰酶消化细胞, 1000 rpm ,4 ℃离心 5 min 沉淀细胞,胰酶消化时间不宜过长,以防引起假阳性。对于特定的细胞,如果细胞无法完全离心至离心管底,可以适当延长离心时间或稍稍加大离心力。小心吸除上清,可以残留约50 μL 左右的培养液,以避免吸走 细胞。

注:用胰蛋白酶消化然后使细胞在最佳细胞培养条件和培养 基中恢复约30分钟,然后在染色。 胰蛋白酶消化会暂时破坏质膜,允许Annexin V结合磷脂酰丝氨酸在细胞膜的细胞质表面上,从而导致假阳性染色。

3. 加入约1mL 4℃预冷的PBS,重悬细胞,再次离心沉淀细胞,小心吸除上清。

4. 用适当的缓冲液重新悬浮细胞,调节其浓度1-5×10^6/mL (缓冲液可选择终浓度为 2mM Hepes/NaOH, pH7.4,28mM NaCl,0.5mM CaCl2溶液)。 

5. 取100 μL 的细胞悬液于5mL流式管中,加入5μL Annexin V-PE 混匀后于室温避光孵育5分钟。 

6. 加入10μL 20μg/mL的7-AAD或PI,并加400 μL PBS,立刻进行流式检测。

注意事项: 

1. 荧光染料均存在淬灭问题,保存和使用过程中请尽量注意避光,以减缓荧光淬灭。 

2. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。