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DNA 纯化回收试剂盒
  • 产品货号:
    BN12022
  • 中文名称:
    DNA 纯化回收试剂盒
  • 英文名称:
    Universal DNA Gel / PCR Purification Kit
  • 品牌:
    Biorigin
  • 货号

    产品规格

    售价

    备注

  • BN12022-100T

    100T

    ¥350.00

  • BN12022-250T

    250T

    ¥850.00

  • BN12022-50T

    50T

    ¥190.00

产品描述

产品货号:BN12022 

产品规格:50T, 100T

应用范围:DNA胶回收,PCR or 酶切产物纯化 

产品简介 

     本试剂盒用于从琼脂糖凝胶中快速、可靠地回收DNA,从PCR、RFLP、磷酸化、标记、连接、杂交及其他酶促反应中纯化DNA 片段。100bp至20kb的DNA片段可通过Mini Column可纯化得到,回收率在50~90%。

产品构成

     image.png

要点 

 DNA Wash Buffer:使用前将60 mL 96-100% 乙醇加入至每个 DNA Wash Buffer 瓶内。 

 100 mg 的凝胶相当于 100 µL 体积。 

 Buffer GC-A/B:低温易产生沉淀,使用前请于 37℃水浴加热至沉淀完全溶解。 

 65℃预热 Elution Buffer 或 ddH2O。 

 所有操作步骤(包括离心)均在室温下进行。

产品贮存及稳定性 

本试剂盒自购买之日起可保存 12 个月。所有试剂及用品可保存于室温(15-25℃)。

实验前需准备的材料 

 小型台式离心机和 1.5 mL 离心管 

 55~65℃水浴锅 

 负压装置 

 96~100%乙醇 

 异丙醇(对于 200 bp 以下片段的回收)

操作步骤(离心法) 

     1.琼脂糖凝胶产物纯化:从凝胶上割下带有目的片段的凝胶到一个 1.5 mL 或 2.0 mL 离心管(称量估算凝胶的体积,确保加入不少于 1 倍体积的 Buffer GC-A),加入 1 倍体积的 Buffer GC-A,置于 55~60℃水浴 8~10 min,期间颠倒混匀 几次,直至凝胶完全融化,冷却离心管至室温。

PCR 产物纯化:加入 2 倍体积的 Buffer GC-B (如 100 μ L 的 PCR 反应液,加入 200 μ L Buffer GC-B),混合均匀,瞬时离心,将溶液收集到管底。 

     注:纯化 200 bp 以下的 PCR 产物,加入 5 倍体积的 Buffer GC-A/B 到 1 倍体积的 PCR 反应液。100 mg 的凝胶相 当于 100 μ L。200 bp 以下片段的纯化,请加入 1 倍体积的异丙醇。

     2.转移上述混合液(每次不超过 700 μ L)至一个 Mini Column(自带 2 mL Collection Tube)),12,000 rpm 离心 1 min, 弃滤液,将 Mini Column 放回 2 mL Collection Tube。重复此步骤至所有样品通过。

     3.加入 600 μ L DNA Wash Buffer,12,000 rpm 离心 30 s,弃滤液,将 Mini Column 放回 2 mL Collection Tube。

     4.重复步骤 3。 

     注:确保使用前按要求加入乙醇至 DNA Wash Buffer 瓶内。

     5.可选:琼脂糖凝胶产物纯化:加入 600 μ L 无水乙醇,12,000 rpm 离心 30 s,弃滤液,将 Mini Column 放回 2 mL  Collection Tube。 

     注:如果纯化的 DNA 产物用于对盐敏感的应用(如测序、平末端连接), 建议采用此步骤。

     6.打开 Mini Column 盖子,12,000 rpm 离心 2 min,去除残留的乙醇。

     注:开盖离心更有利于乙醇的去除。

     7.转移 Mini Column 至一个 1.5 mL Microfuge Tube,在膜中央加入 30~100 μ L Elution Buffer ( 65 ℃ 预热) 或 ddH2O (pH 在7.0~8.5),静置 1 min,12,000 rpm 离心 1 min 洗脱 DNA。 

     可选:将洗脱下来的液体重新上柱,二次洗脱。 

     注:将 Elution Buffer 或 ddH2O 置于 65℃预热,或加入洗脱液后将 Mini Column 置于 65℃静置 5 min 再进行洗脱,将会显著提高 DNA 回收率。

     注:对于 8 kb 以上的片段,加入洗脱液后将 Mini Column 置于 65℃静置 5 min。 

     注:第一次洗脱通常得到 60~70%左右的 DNA。二次洗脱有利于回收剩下 20%的 DNA。

操作步骤(负压/离心法) 

     1. 按照离心法中步骤 1 操作。瞬时离心以收集所有液体至管底。 

     2. 根据制造商指南安装负压设备,将 Mini Column 连接到负压装置上。 

     3. 小心转移混合液至 Mini Column 中,打开负压装置,允许液体通过柱子。 

     4. 加入 600 μ L DNA Wash Buffer,打开负压装置 1 min。 

     5. 重复步骤 4。 

     6. 可选:琼脂糖凝胶产物纯化:加入 600 μ L 无水乙醇,12,000 rpm 离心30 s,弃滤液,将Mini Column 放回2 mL Collection Tube。 

     7. 打开负压装置,干燥空柱子 5 min。 8. 将 Mini Column 转移至一个 1.5 mL Microfuge Tube,在膜中央加入 30~100 μ L Elution Buffer 或 ddH2O,静置 1 min,12,000 rpm 离心 1 min 洗脱 DNA。

     注:将 Elution Buffer 或 ddH2O 置于 65℃预热,或加入洗脱液后将 Mini Column 置于 65℃静置 5 min 再进行洗脱,将会显著提高 DNA 回收率。 

     注:第一次洗脱通常得到 60~70%左右的 DNA。二次洗脱有利于回收剩下 20%的 DNA。