适用于人血清、血浆或细胞培养上清液等样本   

简介  

  PD-1 是Ｔ细胞的跨膜受体属于免疫球蛋白 B7-CD28 家族中的一员，相对分子质量为 55000，由胞外段、疏水性跨膜区及胞内段三者组成，编码基因为第 2 号染色体的 PDCD1 基因，胞内段的酪氨酸残基构成了 2 个基序，即免疫受体酪氨酸抑制基序及转换基序两部分。PD-1 的表达主要存 在于以下细胞的膜表面：(1)绝大部分机体免疫细胞；(2)多种癌细胞。 

  现已证实，B7家族中的 PD-L1(CD274)和 PD-L2(CD273)是 PD-1 的 2 个配体，二者具有37%的同源序列，但表达不同。虽然 PD-L2 与 PD-1 相互作用的亲和力强于 PD-L1，但 PD-L2 通常处于低表达状态且 表达范围局限，故目前认为 PD-1 的主要配体为 PD-L1。

  T 细胞通过双重信号的刺激发挥免疫效应，在信号传导过程中需要协同刺激分子的作用，而协同刺 激分子又分为正性和负性 2 种，正 常 生 理 状 态 下 二 者 保 持 平 衡。然而，在肿瘤患者中，肿 瘤细胞会为自身打造出适合自身生长的肿瘤微环境，通过各种机制异常上调负性协同刺激分子，高表达 PD-L1，从而抑制 Ｔ 细 胞 的 活 化与增殖，并使 T 细胞杀伤肿瘤细胞的作用减弱，甚至丧失。基于 此，肿瘤可躲避机体的细胞免疫作用，发生免疫逃逸，进一步出现肿瘤的发生、发展。PD-1/PD-L1 信号 通路参与肿瘤免疫逃逸机制错综复杂，有研究发现，其可能还与诱导 T 细胞的凋亡、促进上皮细胞间质 化等相关。 

检测原理  

  本实验采用双抗体夹心 ELISA。用抗人 PD-L1/B7-H1 单克隆抗体预包被酶标板，加入适度稀释的样本和标 准品，其中的 PD-L1/B7-H1 会与其单抗结合，洗去游离成分；加入生物素化的抗人 PD-L1/B7-H1 抗体， 抗人 PD-L1/B7-H1 抗体与结合在单抗上的人 PD-L1/B7-H1 结合而形成免疫复合物，洗去游离的成分；加 入辣根过氧化物酶标记的亲合素，生物素与亲合素特异性结合，洗去未结合的酶结合物；加入显色剂， 若反应孔中有 PD-L1/B7-H1，辣根过氧化物酶会使无色的显色剂现蓝色；加终止液变黄。在 450nm 下测 OD 值，PD-L1/B7-H1 浓度与 OD450 值之间呈正比，可通过绘制标准曲线计算出标本中 PD-L1/B7-H1 浓度。

其他实验材料 (不提供，但可协助购买) :  

1. 酶标仪(450nm) 

2. 高精度可调移液器及吸头: 0.5-10, 2-20, 20-200, 200-1000μ l; 一次检测样品较多时，最好用多 通道移液器。

3. 自动洗板机或洗瓶 

4. 37℃温箱 

5. 双蒸水或去离子水

6. 坐标纸 

7. 量筒 

注意事项  

1. 试剂盒保存在2-8℃，除复溶后的标准品，其它成分不可冷冻。 

2. 浓缩生物素化抗体(2a)、浓缩酶结合物(3a)装量极少，运输中颠簸和可能的倒置会使液体沾到管壁 或瓶盖。使用前请离心处理以使附着于管壁或瓶盖的液体沉积到管底。

3. 为避免交叉污染请使用一次性吸头。 

4. 终止液和显色剂具腐蚀性，避免皮肤及粘膜直接接触，一旦接触到这些液体，请尽快用大量水冲洗。

5. 使用干净的塑料容器配制洗涤液，使用前充分混匀试剂盒里的各种成份及样品。 

6. 洗涤酶标板时应充分拍干，不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。 

7. 不要用其它来源的试剂混合或替代该产品的组分，不同批号的试剂盒组份不能混用，请在有效日期 内使用本产品。

8. 在试验中标准品和样本检测时建议作双复孔或三复孔，加入试剂的顺序应一致，以保证所有反应孔 孵育的时间一样。 

9. 充分混匀对反应结果尤为重要，最好使用微量振荡器(使用最低频率进行振荡)。 

10. 避免操作过程中酶标板干燥，干燥会使酶标板上生物成分迅速失活，影响实验结果。 

11. 适当的稀释样品，使样品值落在标准曲线范围内，根据待测因子含量高、中、低的不同，建议采用 1:100, 1:10, 1:2稀释样品。如果样品OD值高于最高标准，适当增加稀释度并重复检测。

12. 标准品稀释液、操作人、移液方式、洗涤方法、孵育时间及温度、试剂盒批次的不同均可能会导致 结果的差异。 

13. 此法可有效的消除可溶性受体、结合蛋白以及生物样品中的其他因素的干扰。 

14. 不同批号试剂不可混用。