FUJIFILM wako | NK 细胞抑制剂 Anti Asialo GM1(Anti AsGM1)

NK细胞抑制剂

Anti Asialo GM1(Anti AsGM1)

糖脂神经节苷脂GM1(ASGM1)在感染病毒时的T细胞及自然杀伤(NK)细胞中表达。ASGM1局部存在于NK和CD8(+)细胞的脂筏结构中，抗Asialo- GM1抗体可降低在各种小鼠、大鼠中的NK细胞活性。

接种抗Asialo-GM1抗体至实验动物，去除NK细胞，用于NK细胞的功能分析或移植其他物种来源的肿瘤组织至小鼠体内^1）2）。

ASGM1也在嗜碱性细胞中表达，有报告称，抗Asia-GM1抗体也可用于去除嗜碱性细胞^3）。

■ 参考文献

1）	Kasai M., Iwamori M., Nagai Y., Okumura K., and Tada T. : J. Immunol., 10, 175 (1980).
2）	Habu S., Fukui H., Shimamura M., Kasai M., Nagai Y., Okumura K., and Tamaoki N. : J. Immunol., 127, 34 (1981).
3）	Hideto, N., Kaori, M., Yohei, K., Yoshiyuki, M., and Hajime K., .: J. Immunol., 186, 10, 5766(2011)

◆原理介绍

　　 Anti Asialo-GM1（Rabbit）抗血清可以减少大鼠或者小鼠来源的自然杀伤细胞（NK 细胞）的活性。该抗体可以与 NK 细胞发生特异性结合，从而抑制 NK 细胞非特异性杀伤靶细胞的活性。NK 细胞是一种免疫监视细胞，其靶细胞包括肿瘤细胞、同种异体移植的器官、组织等。可运用于药物筛选，器官移植，自身免疫疾病等研究。

　　每个产品有具体的体内外的滴定数据。

◆特点

●　已经体内NK细胞活性验证

●　众多文献应用案例

特性	抗Asialo-GM1抗体、冻干品
免疫方法	牛脑组织纯化的Asialo-GM1甲基化BSA（bovine serum albumin），与FCA（Freund’s complete adjuvant）　同时对兔免疫。
纯化方法	50％硫酸铵盐化后，使用含有磷酸缓冲液(pH=7.2)的生理盐水透析。
特异性	与小鼠、大鼠的NK细胞以及小鼠胚胎胸腺细胞反应。
复溶	请在1 mL蒸馏水中复溶。建议使用磷酸缓冲液（pH 7.2）进行稀释。
接种方法	一只小鼠静脉注射10~50 μL。

◆注射方法

小鼠-静脉注射：

10-50 μL（推荐 20 μL）具体剂量由滴度和规格而定。第一次注射在４天内有效，因此两周内需要注射３-４次。

大鼠-静脉注射：

50-250 μL（小鼠剂量的４或５倍）具体剂量还须考虑大鼠的健康状况、体重和 NK 活性。

小鼠和大鼠-腹腔给药：

同等剂量或多于静脉注射。

◆产品信息

制备：	从牛脑组织里提纯的 Asialo-GM1 与甲基化牛血清白蛋白和弗氏完全佐剂一起使用，可进行反复免疫。用含有磷酸缓冲盐水（ph7.2）的 50% 硫酸铵透析后，得到血清里的丙种球蛋白（Gammaglobulin）片段。
内容：	含有唾液酸抗体 GM1 的兔血清 50% 硫酸铵盐析分层物（含蛋白量约 10 mg/mL）。
提纯法：	50% 的硫酸铵盐析后，用含有磷酸缓冲液的生理盐水透析，然后冻干。
特异性：	作用于小鼠和大鼠的自然杀伤细胞；小鼠单核细胞（是一种不含自然杀伤细胞、骨髓、胎儿肝细胞和裸鼠脾脏巨噬细胞的肝细胞）；小鼠胎儿胸腺细胞（12日龄；生存率不断降低直到没有出现新生小鼠）（备注：如果浓度高，也能作用于成熟的T淋巴细胞）
免疫球蛋白类型：	IgG、IgA 和 IgM
重组：	建议用蒸馏水（1 mL）。由于该产品是使用盐来进行冻干的，如果用其它溶剂如 PBS 或 MEM，就能增加其盐浓度。
抗体滴度：	通过免疫凝聚实验得出结果，抗体滴度比例约 1 : 1,000
保存方法：	存储在２~10℃下
包装规格：	１mL样瓶
形状：	干冻品

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◆应用案例

适用的动物模型	运用
肿瘤动物模型	与抗肿瘤药物混合后注入肿瘤动物模型内，研究抗肿瘤药物的作用机理。
肝纤维化动物模型	与治疗肝纤维化的药物混合后注入动物模型体内，研究抗肝纤维化药物的作用机理。
器官移植动物模型	器官移植后，会产生免疫排斥反应，机体内的免疫监视会清除”异己“的细胞和器官。可用于研究器官移植后使用的免疫抑制剂的作用机理
自身免疫疾病动物模型	研究治疗自身免疫疾病药物的作用机理。
干细胞动物模型	抑制 NK 细胞的活性，从而有利于干细胞动物模型的建立。
糖尿病动物模型	研究炎症与糖尿病的关系。

◆抗Asialo-GM1抗体体外活性

向抗Asialo-GM1抗体中添加豚鼠来源补体，并在BALB/c小鼠的胰腺细胞中进行处理。通过靶向YAC-1细胞(●)体外检测NK活性。

效应子/靶标的比率为50：1，○表示补体处理后BALB/c小鼠胰腺细胞的NK活性。

※ BALB/c小鼠经聚(I:C)钠盐100 μg（0.2 mL的500 μg/ mL）处理后，正常饲养18小时后开始下一步操作。

◆抗Asialo GM1抗体体内活性

向BALB/c小鼠腹腔内注射抗Asialo-GM1抗体，并检测单次给药（效应子/靶标= 50：1）3天后收集的胰腺细胞对YAC-1细胞的肿瘤溶解度。

※ BALB/c小鼠经聚(I:C)钠盐100 μg（0.2 mL的500 μg/ mL）处理后，正常饲养18小时后开始下一步操作。

■ 对照：正常兔血清

腹腔注射量	肿瘤溶解度（%）
100 μL	70.8

■ 抗Asialo-GM1抗体

腹腔注射量	肿瘤溶解度（%）
10 μL	7
25 μL	8.4
50 μL	2
100 μL	0

※ 本页面产品仅供研究用，研究以外不可使用。

产品编号	产品名称	产品规格	产品等级
014-09801(986-10001)	Anti asialo GM1 (Rabbit) NK细胞抑制剂	1 mL	for Immunochemistry

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了解应用案例

Anti Asialo GM1的抗血清可以与NK细胞（自然杀伤细胞）结合，抑制NK细胞非特异性杀伤靶细胞的活性。靶细胞包括肿瘤细胞，同种异体移植的器官、组织等。可用于药物筛选、器官移植、自身免疫疾病研究等。NK细胞属于天然免疫细胞，具有免疫监视功能。

　　特异性：小鼠、大鼠的NK细胞，小鼠单核细胞（不含有NK细胞的肝脏细胞，骨髓，胎儿肝脏细胞，裸鼠巨噬细胞的脾细胞），胎儿T淋巴细胞（12天）。

◆研究糖尿病的免疫治疗

　　据报道，抗细胞凋亡细胞因子IL-15具有促进NK细胞和T细胞（包括调节性T细胞，Tregs）存活和激活上述两种细胞活性的功能。在患有糖尿病的NOD小鼠体内反复注射IL-15。如果每天一次，注射2周，既不抑制也不加速未处理NOD小鼠患糖尿病的情况。但是NK细胞活性丧失的NOD小鼠注射IL-15可以明显减少糖尿病的发病率和延迟糖尿病发病时间，但是NK细胞活性丧失不注射IL-15的小鼠依然病发糖尿病。在用IL-15处理，NK细胞活性丧失的NOD小鼠体内产生的保护效应与CD4⁺CD25⁺ Tregs免疫抑制活性增加有关。在该项实验中，用Anti AsGM1注射小鼠，抑制NK细胞活性，导致NOD小鼠NK细胞活性缺失。

参考文献：Jinxing Xia et al., Clinica l Immunology.(2010) 134, 130–139 <全文>

◆研究败血症中NK细胞的功能

　　NK细胞和NKT细胞都属于天然免疫系统，但在细菌引起的败血症中这两种细胞的作用是有争议。用Anti Asialo GM1处理小鼠，成为NK细胞活性抑制的小鼠；用CD1d单抗处理小鼠，成为NKT细胞活性抑制的小鼠；同时用同型对照单抗处理小鼠，作为阴性对照。之后这些小鼠感染肺炎链球菌。分析血清和组织样品中细菌的含量，细胞因子，脾细胞凋亡率、用流式鉴定细胞，同时也分析脾细胞miRNA的表达。结果发现NK细胞活性抑制的小鼠延长了存活率。一旦NKT细胞激活抑制，与其他细胞群相比，脾脏的NK (CD3−/NK1.1+)细胞数目增加。NKT细胞活性抑制导致小鼠体内的细菌含量升高，导致血清和脾细胞IFN-γ水平升高。抗CD1d处理小鼠的脾细胞miRNA分析显示miR-200C和miR-29a下调，miR-125a-5p上调。这些变化发生在NK细胞活性抑制后。NK细胞可能与肺炎球菌肺炎的死亡率有关。抑制NKT细胞的激活导致(CD3−/NK1.1+)细胞数目增加，IFN-γ水平升高，改变脾细胞miRNA表达。

参考文献：Eirini Christaki et al., Journal of Immunology Research, Volume 2015 (2015),Article

　　　　　ID 532717, 10 pages <全文>

◆研究自身免疫性疾病的NK细胞功能

　　NK细胞是先天免疫淋巴细胞，在先天免疫和适应性免疫中均起着关键性作用。它在小鼠体内通过NK细胞消耗 Abs，特别是抗唾液酸GM1 (ASGM1)，起关键作用。此次研究中，我们通过整个嗜碱性粒细胞群体组成如表达NK细胞群一样，来表达ASGM1以及CD49b（DX5），并通过抗ASGM1在体内通过嗜碱性粒细胞消耗的抗FcεRIαAb有效地消融。抗ASGM1介导的嗜碱性粒细胞的消耗与各种小鼠品系的NK细胞消耗有关，与NK1同种异型和MHC H2单体型（包括C57BL/6，BALB/c，C3H和小鼠A/J）无关。这些结果将嗜碱性粒细胞定义为以前未被认识到的抗ASGM1介导细胞消耗的靶标，并引起人们对嗜碱性粒细胞的关注，而不是NK细胞或除了NK细胞外对抗ASGM1处理的小鼠中观察到的某些表型。

参考文献：Nishikado H, Mukai K, Kawano Y, et al. NK cell-depletinganti-asialo GM1 antibody exhibits

　　　　　a lethal off-target effect on basophils invivo[J]. The Journal of Immunology,

　　　　　2011, 186(10): 5766-5771<全文>

◆研究肿瘤的免疫治疗

　　肿瘤的发展过程包括血管新生，肿瘤尺寸增大和肿瘤转移。使用CXCL14/BRAK (CXCL14) 转基因小鼠研究过度表达的CXC趋化因子配体14 (CXCL14) 在上述生物学现象中的作用。与野生型小鼠相比，转基因小鼠经AOM/DSS诱导的结肠血管新生的发病率显著低很多。肿瘤细胞注射到这些小鼠后，肿瘤尺寸发生变化。与野生型的相比，转基因小鼠肺中转移小瘤的数目明显少，肿瘤的尺寸也明显变小。在注射肿瘤前后注射Anti Asialo GM1减少了CXCL14在肿瘤生长方面和肿瘤转移的抑制效应，表明激活的NK细胞在CXCL14介导的抑制肿瘤生长和转移期间起重要作用。CXCL14也表达在B16黑色素瘤细胞内表明NK细胞在肿瘤转移方面的重要性。而且转基因小鼠在注射肿瘤细胞后的存活率显著增长。这些转基因小鼠没有明显的不正常，预计肿瘤抑制/预防方面CXCL14起着重要作用。

参考文献：Hata R et al.,Scientific Reports(2015) 5 : 9083 | DOI: 10.1038/srep09083 <全文>

动物模型	运用
肿瘤动物模型	与抗肿瘤药物混合后注入肿瘤动物模型体内，研究抗肿瘤药物是否通过激活NK细胞活性达到杀伤肿瘤细胞的作用。
肝病动物模型	与治疗肝病的药物混合后注入动物模型体内，研究药物是否通过激活NK细胞活性达到治疗肝病的效果。
器官移植动物模型	器官移植后会发生免疫排斥反应，机体内的免疫监视系统会清除：异己“的细胞和器官。可用于研究器官移植后免疫抑制剂的作用机理。
自身免疫疾病动物模型	研究治疗自身免疫疾病药物的作用机理。
干细胞动物模型	移植NK细胞活性，有利于干细胞动物模型的建立。

◆参考文献

[1]	Nishikado H, Mukai K, Kawano Y, et al. NK cell-depletinganti-asialo GM1 antibody exhibits a lethal off-target effect on basophils invivo[J]. The Journal of Immunology, 2011, 186(10): 5766-5771.
[2]	Kasai, M., Iwamori, M., Nagai, Y., Okumura, K. and Tada, T.: Eur. J. Immunol., 10, 175 (1980)
[3]	Habu, S., Fukui, H., Shimamura, M., Kasai, M., Nagai, Y., Okumura, K. and Tamaoki, N.: Immunol., 127, 34 (1981)
[4]	Jinxing Xia et al., Clinica l Immunology.(2010) 134, 130–139.
[5]	Eirini Christaki et al., Journal of Immunology Research, Volume 2015 (2015), Article ID 532717, 10 pages.
[6]	Hata R et al.,Scientific Reports(2015) 5 : 9083 \| DOI: 10.1038/srep09083
[7]	Ivanova, D. L., Denton, S. L., & Gigley, J. (2019). Anti-Asialo GM1 treatment during secondary Toxoplasma gondii infection is lethal and depletes T cells. bioRxiv, 550608.
[8]	Sung, C. C., Horng, J. H., Siao, S. H., Chyuan, I. T., Tsai, H. F., Chen, P. J., & Hsu, P. N. (2020). Asialo GM1-positive liver-resident CD8 T cells that express CD44 and LFA-1 are essential for immune clearance of hepatitis B virus. Cellular & Molecular Immunology, 1-11.
[9]	Fujii, Y., Gerdol, M., Kawsar, S. M., Hasan, I., Spazzali, F., Yoshida, T., ... & Sugawara, S. (2019). A GM1b/asialo‐GM1 oligosaccharide‐binding R‐type lectin from purplish bifurcate mussels Mytilisepta virgata and its effect on MAP kinases. The FEBS journal.
[10]	Kikuchi, N., Ye, J., Hirakawa, J., & Kawashima, H. (2019). Forced expression of CXCL10 prevents liver metastasis of colon carcinoma cells by the recruitment of natural killer cells. Biological and Pharmaceutical Bulletin, 42(1), 57-65.
[11]	Jones, N. M., Yang, H., Zhang, Q., Morales-Tirado, V. M., & Grossniklaus, H. E. (2019). Natural killer cells and pigment epithelial-derived factor control the infiltrative and nodular growth of hepatic metastases in an Orthotopic murine model of ocular melanoma. BMC cancer, 19(1), 484.
[12]	Vandenhaute, J., Avau, A., Filtjens, J., Malengier-Devlies, B., Imbrechts, M., Van den Berghe, N., ...& Wouters, C. (2019). Regulatory Role for NK Cells in a Mouse Model of Systemic Juvenile Idiopathic Arthritis. The Journal of Immunology, 203(12), 3339-3348.
[13]	Junqueira-Kipnis, A. P., Trentini, M. M., Marques Neto, L. M., & Kipnis, A. (2020). Live Vaccines Have Different NK Cells and Neutrophils Requirements for the Development of a Protective Immune Response Against Tuberculosis. Frontiers in Immunology, 11, 741.
[14]	Murer, P., Kiefer, J. D., Plüss, L., Matasci, M., Blümich, S. L., Stringhini, M., & Neri, D. (2019). Targeted delivery of TNF potentiates the antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity of an anti-melanoma immunoglobulin. Journal of Investigative Dermatology, 139(6), 1339-1348.
[15]	Turaj, A. H., Dahal, L. N., Beers, S. A., Cragg, M. S., & Lim, S. H. (2017). TLR-3/9 Agonists Synergize with Anti-ErbB2 mAb. Cancer research, 77(12), 3376-3378.
[16]	Sorski, L., Melamed, R., Matzner, P., Lavon, H., Shaashua, L., Rosenne, E., & Ben-Eliyahu, S. (2016). Reducing liver metastases of colon cancer in the context of extensive and minor surgeries through β-adrenoceptors blockade and COX2 inhibition. Brain, behavior, and immunity, 58, 91-98.

◆其他文献

本公司的抗Asialo-GM1抗体在以下为代表的各种文献中均有应用案例。

1.	Hudson, W. A., Li, Q., Le, C., and Kersey, J. H., : Leukemia, 12, 2029 (1998).
2.	Murphy W. J., Durum S. K., Longo D. L., : PNAS, 89, 10, 4481 (1992).
3.	Bentzmann S., Roger P., Dupuit F., Bajolet-Laudinat O., Fuchey C., Plotkowski C. M., Puchelle E. : Infection and immunity, 64, 5, 1582 (1996).
4.	Nishikado H., Mukai K., Kawano Y., Minegishi Y., Karasuyama H. : J. Immunol., 186, 10, 5766(2011).
5.	Victorino, F., Sojka, K. D., Brodsky, S. K. McNamee, N. E., Masterson, C. J., Homann, D., Yokoyama, M. W., Eltzschig, K. H., Clambey, T. E., : J. Immunol., 195, 10, 4973(2015).