随着生命科学的发展，围绕蛋白进行的研究越来越多，抗体试剂在实验中的重要性越来越举足轻重。面临着纷呈复杂 的抗体试剂市场，如何选择到适合自己实验的抗体就变得尤为重要。

当我们要检测目的蛋白在组织中表达情况的时候，如何选择适合我们实验需要的抗体，并恰当保存使用，是每个科研 人员需要细心考虑的。抗体种类繁多，品牌众多，技术参数不一，价格和质量更是相差甚大，如何购买到高质量价格合适 的抗体，并准确地做出我们想要的结果，其中有很多细节需要注意。

一、一抗的选择 

目的蛋白的信息

确定检测的目的蛋白是否与抗体识别蛋白信息吻合，注意中英文名称、别名等信息。

某些蛋白具有多种不同的亚型，这需要在选择抗体之前确定要研究的蛋白亚型。还有些抗体由于其抗原选择的是 不同蛋白亚型共有的肽段区域，是可以同时识别多个亚型的。有的蛋白通过剪切加工才能转变为成熟的活性形式，如 Caspase、Insulin 等，这就需要根据研究需要，选择针对前体或成熟形式的特异性抗体。 

抗体制备所用抗原的信息

抗体是由各种不同抗原免疫宿主制备得来，抗原类型包括：全长蛋白、蛋白片段、多肽、全有机体 ( 如：细菌 ) 或细胞， 抗体说明书一般都有制备抗体所用抗原的描述。在有些情况下，需要查阅抗体制备相关抗原信息来选择抗体。比如，针对 重组表达蛋白选择抗体，如果是表达部分蛋白片段，则需要注意抗体的抗原区域是否在该片段区域内。如果打算用 FACS 流式检测活细胞的表面蛋白，则需选择含该表面蛋白的胞外域来免疫制备的抗体。某些特殊蛋白 ( 如病原体蛋白 ) 未经过 内部验证种属的目的蛋白，需要求助生产商进行蛋白同源性序列比对，并结合制备抗体所用的抗原序列，查看交叉反应的 情况。

某些抗体要求样本经过某些特殊处理，例如：许多抗体只识别还原和变性的、表位已暴露不受二级四级结构阻碍的蛋 白样本，另一方面，某些抗体仅识别天然折叠状态的蛋白。当选择免疫组化的抗体时，应注意某些抗体只识别未固定的冷 冻的组织，而另一些抗体则适用于无需抗原修复解交联步聚的甲醛固定石蜡包埋的组织，这些都会在抗体说明书上应用部 分标示出来。

了解样本抗原蛋白的结构性质有助于选择最合适的抗体，待测样本蛋白的结构域和样本在提取和处理过程中是否会变 性，蛋白空间构象的改变，会影响抗体的免疫亲和反应。 

修饰位点的信息 

在选择合适的抗体用于特定修饰位点研究时，需要特别注意，不同位点的修饰可能有不同的机制存在，不宜一概而论。 有关不同修饰位点的功能，可以通过查阅文献确定。另外，由于有的蛋白存在不同亚型且序列高度同源，而不同亚型的某 些磷酸化修饰位点周围的序列完全相同，因此针对这些保守的修饰位点的抗体往往会同时识别不同亚型的相似修饰位点。 

实验样本的种属信息

抗体一般会在出厂前对常见的不同种属目标样本进行内部验证，以确定可以满足的不同种属类型，可以在产品说明书 的 Species-Reactivity 一栏中看到 ( 如人、小鼠、大鼠等 )。通过验证，达到质检要求的种属会明确标记，以备参考。一些 没有标明的种属，也有可能是可以应用的，建议通过联系抗体公司技术支持来获得相关抗原序列比对的信息，根据蛋白同 源性的情况以确定是否可以用于该种属的样本。为了避免实验风险，尽量不要使用说明书中没有提及的标本的种属的抗体。

抗体应用的实验类型

抗体一般会在出厂前对常见的抗体应用 (WB、IP、ChIP、IHC、IF、FCM) 进行内部验证，以确定是否可以满足不同 应用要求。通过验证，达到质检要求的抗体会明确标记，以备参考。一些没有标明的应用，往往是因为经过验证没有达到 质检标准 , 因而不推荐根据经验或常识去推测某个抗体的应用。比如，有的客户会认为，既然某个抗体可以用于 IHC，根 据经验推断应该可以用于 IF，但毕竟这是两个不同的应用，这样做可能会浪费很多时间和试剂而不能获得结果。抗体厂家 不推荐您使用没有标明的应用，可以挑选其他的货号，可能有适用于这个应用的更好的其它产品。如果抗体说明书没有提 及的应用类型，并不意味着该抗体一定不适用于此种应用类型，而仅是说明尚未通过此种应用的内部验证。为了避免实验 风险，当计划使用说明书中没有提及的应用方法时，可向生产商申请试用装，进行初步预实验后，再决定是否购买。 标记物的信息 有一些实验，如多重免疫荧光、多指标流式测定可能会使用到直接标记的一抗(简称直标一抗)。在进行直标一抗选择时， 需要了解到自己将要使用的仪器能检测到的荧光范围，针对不同的参数要求选择合适的标记物。在设计多重实验时，应考 虑每种荧光基团的独特性质，如最大吸收波长和最大发射波长，消光系数和斯托克斯位移等因素。有关标记物选择的细节， 我们将在后面的免疫荧光与流式技术部分详加介绍。 文献引用情况 有的时候，针对某一个蛋白可能有不同货号的产品，很多人喜欢通过查阅文献来确定自己将要选择的抗体货号是否有 过较好的表现。一般抗体公司都会收集引用自己产品的文献，这些产品都是经过 SCI 验证过的，所以大可放心地使用。不过， 也不排除抗体公司近期生产出更好的抗体，可以向公司咨询。 

二、二抗的选择 

一抗的来源种属 

主要根据一抗来源种属而决定二抗，如一抗是小鼠来源，那二抗就选择抗小鼠的即可。

二抗应用的实验类型

针对不同的实验应用，需要考虑二抗所偶联的标记物，如 HRP、Biotin、荧光素等。WB 与 IHC 所用的二抗，所带的 标记物主要选择 HRP 和 Biotin，而免疫荧光和流式应用可根据实验设计的需要，选择不同荧光素标记的二抗，如 FITC、 Cy3、PE 等。