一、蛋白样品的制备与定量

蛋白样品制备是 Western Blotting 的第一步，也是决定 WB 成败的关键步骤之一。蛋白提取总体原则与注意事项包括：1) 尽可能提取完全或降低样本复杂度使得集中于提取目的蛋白；2) 保证蛋白处于可以溶解状态（选择合适的裂解液的pH 、盐浓度、 表面活性剂、还原剂等）；3) 提取过程防止蛋白降解、聚集、沉淀、修饰等（冰盒中低温操作，加入合适的蛋白酶和磷酸酶抑制剂）；4) 尽量去除核酸，多糖，脂类等干扰分子。蛋白定量的方法有很多种，应用较多的主要有两种：BCA蛋白定量检测法和Bradford蛋白定量检测法，用RIPA裂解液裂解得到的蛋白样品，可以用BCA蛋白浓度测定试剂盒测定蛋白浓度，由于含有较高浓度的去垢剂，不能用Bradford法测定由RIPA裂解液裂解得到样品的蛋白浓度。

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百瑞极RIPA组织/细胞裂解液（BN25011）是一种传统的细胞组织快速裂解液，得到的蛋白样品可用于常规的Western、IP等实验。RIPA裂解液种类很多，根据其裂解液的强度不同分为强、中、弱三类，请根据检测样本与检测目的的不同选择适当的裂解液。 

百瑞极蛋白酶抑制剂Cocktail（BN25002)由6种独立的蛋白酶抑制剂（不含 EDTA）按照优化的配比配置而成的蛋白酶抑制剂混合物,作用的靶点分别为丝氨酸蛋白酶，丝氨酸半胱氨酸蛋白酶，氨肽酶，半胱氨酸蛋白酶 和天冬氨酸蛋白酶等，是广谱蛋白酶抑制剂。

百瑞极BCA蛋白浓度测定试剂盒（BN27109)是一种灵敏并且抗干扰能力强的蛋白定量检测试剂盒，对去垢剂耐受能力强，特别适合用于 RIPA 裂解液提取的细胞和组织蛋白样品中的蛋白浓度测定。 

二、SDS-PAGE电泳

样品制备完成后，需要通过电泳将不同分子量大小蛋白有效分开，以便能够检测目的蛋白的表达水平，广泛采用的是SDS-PAGE，在电泳体系中加入变性剂SDS和还原剂DTT或者巯基乙醇等，蛋白质分子的多聚体或者高级结构会被打开，蛋白质氨基酸侧链和SDS结合形成蛋白-SDS复合物，所带的负电荷大大超过了蛋白质原有的电荷量，因此可以有效消除不同蛋白质分子间的电荷差异和空间结构差异。所以SDS-PAGE检测时，可以利用分子筛效应将蛋白质依据分子量大小分离开来。

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百瑞极彩虹245广谱蛋白Marker(11-245KD,BN27002)包含12种彩色预染的已知分子量标准蛋白，可用于直接观察蛋白质电泳状况以及清晰地判断Western Blot的转膜效果。

百瑞极SDS-PAGE电泳缓冲液（BN20116）为10×Tris-甘氨酸电泳缓冲液，常用于蛋白变性聚丙烯酰胺凝胶电泳实验，10×浓缩液，便于储存、操作简便。 

三、转膜

转膜是将电泳后分离的蛋白质从凝胶中转移到固相载体上，同时维持其相对位置和分辨率的过程,主要分两种：湿转和半干转。半干转耗时短，但是更适合小分子蛋白的转印，而湿转蛋白分子量范围较宽，两者的比较见表在 Western Blot 实验中，常用的是湿转。

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百瑞极10×电泳转移缓冲液（BN20181）是用于中湿法以及半干法电泳转膜的缓冲试剂，为10×浓缩液，不含 SDS 和甲醇，便于储存、操作简便。

百瑞极WB 封闭液(BN21013)用于转移后蛋白的NC膜或PVDF膜非特异性结合位点的封闭，可以减少后续的一抗或二抗与膜的非特异性结合，降低背景着色，增强信噪比。

百瑞极膜再生液（BN21014）可以对同一张膜进行多次WB检测，特点是无毒、无味、无害，室温下使用，室温下保存，可对同一张膜进行 5 次以上的WB检测。

四、免疫反应与检测

转膜后凝胶中的蛋白被固定在膜上，需要有效检测目标蛋白，定性及定量样品中蛋白质与对应丰度。蛋白印迹检测使用针对目标蛋白具有特异性的一抗，再杂交酶或荧光分子标记的二抗，然后进行检测。正确选择、使用合适的一抗和二抗对于最大化信号，同时降低背景至关重要。蛋白上样内参的正确使用对于蛋白印迹的信号归一化也至关重要。

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百瑞极Western一抗/二抗稀释液（BN21010/21012）是新一代的高效抗体稀释液，总体效果显著优于传统的基于BSA(牛血清白蛋 白)、脱脂奶粉等的抗体稀释液，有效节约抗体，稀释液不含血清和白蛋白，确保极高的信噪比。

百瑞极羊抗兔IgG-HRP标记（BN20601）、羊抗小鼠IgG-HRP标记（BN20602），为常用HRP标记二抗。

百瑞极超敏化学发光检测试剂盒（BN16009）为免疫印迹实验提供明亮的信号和低皮克级检测灵敏度，ECL底物能够兼容各种膜、封闭液和宽范围抗体稀释液，以出色性能、通用性和高性价比，满足用户的免疫印迹应用需求。