01
pH检测染料
PH是“potential Hydrogen”的缩写,其计算方法;pH = -1g[H+] ,它是表示溶液中H+的浓度指标,反映溶液的酸碱性强弱。pH 值是人们通常用来衡量人体体液的酸碱度,pH值是溶液中亲离子浓度指数的数值,一般在 0~14 之间,当 pH=7 时溶液为中性,pH<7 时为酸性,值越小酸性越强,pH>7 时为碱性,值越大,碱性越强.
人体在正常生理状态下,血液的pH值精确保持在 7.35~7.45 之间,为弱碱性,这个 pH 值是人体细胞完成生理功能的最佳酸碱度,少一分或多一分都不行,人体酸碱平衡非常重要,如果低于7.45会发生酸中毒,pH 值下降 0.2,机体的输氧量就会减少 69.4% 造成整个机体组织缺氧。高于 7.45 会碱中毒,如果严重会有生命危险。
人体的一切生命活动都需要酶的催化,(酶使人体所进食的食物得到消化和吸收,并且维持内脏所有功能,包括:细胞修复,消炎排毒,新陈代谢,提高免疫力,产生能量,而pH值对酶的活性有重要的影响。人体各部分要保持生理与结构的稳定,就必须保持稳定的 pH 值。
BCECF, AM 是一种可以穿透细胞膜检测细胞内pH的荧 光染料。BCECF, AM没有荧光,进入细胞后可以被细胞内的 酯酶剪切形成BCECF,从而被滞留在细胞内。BCECF在适当 的pH值条件下可以被激发形成绿色荧光。最大激发波长和 发射波长因pH的不同而有所不同,最大激发波长在503 nm 左右,最大发射波长在520 nm左右,实际检测时推荐使用的 激发波长为488 nm,发射波长为535 nm。
BCECF, AM 不仅被广泛用于哺乳动物细胞的研究,也用于动物组织、植物细胞、细菌和酵母等的体内 pH 水平检 测。此外,在细胞内有pH变化的细胞毒性、细胞凋亡、细胞粘附、药物抵抗、细胞趋化等过程中 BCECF, AM 也被广泛应用。
活性氧
活性氧(Reactive Oxygen Species,ROS)是机体进行正常有氧代谢的产物,是由氧组成,含氧并且性质活泼的一类物质的总称。包含超氧阴离子(O2-)、过氧化氢(H2O2)、羟自由基(OH-)、臭氧(O3)和单线态氧(1O2)等,由于它们含有不成对的电子,因此具有很高的化学反应活性。
H2DCFDA 是活性氧族的细胞渗透性指示剂,可在细胞内的酯酶发生氧化反应去除其乙酸基团之前保持非荧光性。在氧化环境中,H2DCFDA 转变成发出绿色荧光的 2,7-二氯二氢荧光素。
Dihydroethidium(Hydroethidine)是常用的 DNA 染料溴化乙锭的还原形式,它可以检测活细胞内的氧化活性,也可以检测吞噬细胞的“呼吸爆发”。Dihydroethidium 本身在细胞中具有蓝色荧光(Ex/Em:355/420 nm),当它进入细胞中,脱氢后会成为氧化形式的乙锭,当与 DNA 嵌合时,氧化形式的乙锭会发出红色荧光(Ex/Em:518/605 nm)。
二氢乙锭(Dihydroethidium, DHE),可自由透过活细胞进入细胞内,并被细胞内的ROS氧化,形成氧化乙锭;氧化乙锭可掺入染色体DNA中,产生红色荧光。根据活细胞中红色荧光的产生,可以判断细胞ROS含量的多少和变化。二氢乙锭在细胞内主要被超氧阴离子型ROS氧化,用流式细胞仪或荧光显微镜可直接观察,是一种快速简便的组织或培养活细胞中ROS经典检测方法。
DCFH-DA(二氯二氢荧光素-乙酰乙酸酯)本身无荧光,可自由透过活细胞膜进入细胞内,并被细胞内的酯酶水解,形成 DCFH,DCFH 无荧光且不能通透细胞膜,从而被细胞内的活性氧氧化生成有荧光的 DCF。根据活细胞中荧光的产生,可以判断细胞活性氧的含量和变化。用流式细胞仪或荧光显微镜可直接观察,是一种经典的组织或活细胞中活性氧检测方法。
NO
许多生物分子都具有复杂的结构,但一氧化氮只包含两个原子——一个氮原子和一个氧原子,虽然一氧化氮是这样简单的分子,但在我们身体内产生巨大的影响,具有许多重要的生物学功能。
一氧化氮检测试剂盒(Nitric Oxide Assay Kit)是一种灵敏简单的检测一氧化氮的试剂盒。生物机体内有三种一氧化氮合酶(Nitric Oxide Synthase, NOS)。一氧化氮合酶催化 L-精氨酸产生一氧化氮,发挥复杂的生理功能。一氧化氮产生之后,会被迅速代谢为硝酸盐和亚硝酸盐,本试剂盒利用经典的 Griess 试剂对亚硝酸盐 进行定量测定来间接测定细胞释放的一氧化氮。本试剂盒以亚硝酸钠为标准品,检测线性范围为 3.12-200 μM,灵敏度≤3.12 μM。本试剂盒能够检测动物细胞培养上清和血浆中的一氧化氮。
04
代谢小分子物质
烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(Nicotinamide adenine dinucleotide, NAD)是所有细胞中都存在的一种辅酶,包括NAD+(氧化型)和NADH(还原型)两种形式。NAD+既是氧化还原反应过程中传递电子的辅酶,又可以作为很多酶的底物来参与细胞内反应。
烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(Nicotinamide adenine dinucleotide phosphate, NADP)是很多氧化还原反应的辅酶,包括NADP+(氧化型)和NADPH(还原型)两种形式。NADP+也参与到生物合成反应中,比如脂质和核酸的合成。传统的NAD+/NADH和NADP+/NADPH测定是通过检测340 nm处的吸收来完成的,该方法灵敏度低且易受干扰。
NAD/NADH、NADP/NADPH检测试剂盒都是基于WST-8的显色反应,通过比色法来检测细胞、组织或其它样品中NAD+(氧化型辅酶Ⅰ)和NADH(还原型辅酶Ⅰ)、NADP+(氧化型辅酶Ⅱ)和NADPH(还原型辅酶Ⅱ)各自的量、比值和总量的检测试剂盒。试剂盒的特异性强。在反应过程中NAD+被还原为NADH,NADH将WST-8还原成橙黄色formazan(甲臜),在450 nm左右有最大吸收峰/在反应过程中NADP+被还原为NADPH,NADPH将WST-8还原成橙黄色formazan(甲臜),在450 nm左右有最大吸收峰。灵敏度高可检测0.1 μM-10 μM NAD+或NADH/ NADP+或NADPH。
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