疏水层析
定义:
疏水层析(HIC)是一种液相吸附层析,它是依据生物分子之间的疏水性的差别来进行分离的。固定相由非极性物质(如烃类、苯基等)组成的层析,非极性分子间或分子的非极性基团间具有吸引力,不同分子的非极性基团与固定相的非极性物质结合的强弱不同,从而达到分离。该方法多用于蛋白质的分析和分离。
原理:
蛋白质和多肽等生物大分子的表面常常暴露着一些疏水性基团,疏水性基团可以与疏水性层析介质发生疏水性相互作用而结合。
不同的分子由于疏水性不同,它们与疏水性层析介质之间的疏水性作用力强弱不同,溶液中的高离子强度可以增强蛋白质或多肽等生物大分子与疏水性层析介质之间的疏水作用。利用这个性质,在高离子强度下将待分离的样品吸附在疏水性层析介质上,然后通过线性或阶段降低离子强度选择性的将样品解吸。疏水性弱的物质,在较高离子强度的溶液时被洗脱下来,当离子强度降低时,疏水性强的物质才随后被洗脱下来。
疏水层析填料的种类
什么要选择琼脂糖凝胶为基架?
基质主要有多糖类如琼脂糖、纤维素和人工合成聚合物类如聚苯乙烯、聚丙烯酸甲酯类。其中,半刚性的琼脂糖类凝胶仍是应用最广泛的疏水介质。
琼脂糖凝胶具有更强的刚性、更快的传质速度使得琼脂糖凝胶有更优异的压力流速曲线。
琼脂糖凝胶具有更高的流速、更灵活的柱床高度使得琼脂糖凝胶有更灵活的工艺操作窗口。
FF、HP、CL的区别
FF: 疏水层析介质,快流速,适合生物大分子和疫苗的分离纯化等。
HP: 疏水层析介质, 高分辨率,适合生物大分子和疫苗的分离纯化等。
CL-4B : 疏水层析介质,适合生物大分子和疫苗的分离纯化等。
不同配基的区别
苯基·琼脂糖凝胶 FF (Phenyl-Berpharose FF)
是一种将苯基键合在琼脂糖凝胶微球上形成的较强疏水性疏水层析分离介质。
辛基·琼脂糖凝胶 FF(Octyl-Berpharose FF)
是一种将辛基键合在琼脂糖微球上形成的中等疏水性疏水层析分离介质。
丁基·琼脂糖凝胶FF (Butyl-Berpharose FF)
是一种将丁基键合在琼脂糖凝胶微球上形成的较弱疏水性疏水层析分离介质。
实验流程
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