镍-琼脂糖凝胶FF主要用于纯化带组氨酸标签（His-Tag）的重组蛋白。纯化原理是利用重组蛋白组氨酸标签的咪唑环可与过渡金属Ni2+形成稳定的配位键，因此能特异、牢固、可逆地吸附于固定这些金属离子的基质，结合了His-Tag重组蛋白的镍-琼脂糖凝胶FF一般通过增加咪唑浓度进行竞争洗脱。
一、填料结构
固定相是由基质、间隔臂、螯合剂和金属离子四部分组成。螯合剂是指将金属离子固定在基质上的物质，与基质共价结合的活性基团。目前常见螯合剂有IDA、NTA、TED。结构如下：
二、如何选择不同螯合剂的镍柱？
镍有6个配位，IDA与镍结合时会占据3个配位，剩余3个配位与目标蛋白的His标签上的组氨酸结合。
NTA与镍结合时会占据4个配位，剩余2个配位
EDA与镍结合时会占据5个配位，剩余1个配位
示意图如下：
因为镍的配位是有限的，所以螯合剂与金属离子结合力越强，它与蛋白结合能力越弱。如下图所示：
不同配基
除常见亲和层析柱的配基--镍以外，还有其他的金属离子作为配基，它们与蛋白亲和力与特异性呈现相反趋势。
螯合剂可选择不同金属离子作为配基，除上文介绍的IDA、NTA、TED三种螯合剂外，还有IMAC。
它们在螯合金属离子后可用于富含组氨酸、色氨酸、半胱氨酸的蛋白质纯化，其中最常见的是用于融合了6-8个组氨酸标签的蛋白质纯化。
与IDA琼脂糖凝胶FF相比，IMAC琼脂糖凝胶FF一般可以更牢固的结合金属离子，在纯化标签蛋白方面，有可能获得更高纯度的样品。
钴琼脂糖凝胶FF预装柱
纯化原理是利用重组蛋白组氨酸标签的咪唑环可与过渡金属Co2+形成稳定的配位键,因此能特异、牢固、可逆地吸附于固定这些金属离子的基质,结合了His-Tag 重组蛋白的钴琼脂糖凝胶FF一般通过增加咪唑浓度进行竞争洗脱。
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