储存条件：4℃ 避光保存，有效期见外包装。

产品参数：Ex/Em: 480/520 nm（结合 dsDNA）

产品介绍 

     PicoGreen 是荧光检测dsDNA 并进行定量的一种产 品，这种方法非常灵敏。常用于分子生物学技术：cDNA 文 库的构建、亚克隆的DNA 片段纯化及应用，比如进行DNA 定量、产物扩增和引物的进一步检测。常规的DNA 含量的 检测方法是在260nm处测其吸光值。这种方法的主要缺点是 核苷酸、单链核酸和蛋白质对信号的影响很大，并且还会受 到核酸制备过程中污染物的干扰，无法区分DNA和RNA， 而且这种方法不灵敏（5 μg/mL dsDNA溶液A260 = 0.1）。 PicoGreen 定量检测方法简单、方便，成为生物制品残留 DNA检测的标准。

     PicoGreen 只有与dsDNA 结合后才发出荧光，并且所 发荧光强度与DNA 浓度成正比。 PicoGreen 可以检测出 25pg/mL - 1000ng/mL 范围内的dsDNA，且线性关系较好 (R2>0.99)。

使用方法 

试剂制备

     PicoGreen dsDNA 定量试剂是以1 mL 的浓缩液形式 保存在无水的DMSO（二甲基亚砜）中。实验时，配制操 作溶液：2× PicoGreen试剂，将浓缩液用1×TE（10 mMTris-HCl，1 mM EDTA，pH7.5）按1:200的比例稀释。对 于终体积为200 μL 的检测体系，如果要准备足够的操作溶 液测定20 个样品，可在2 mL 1× TE中加入10 μL PicoGreen dsDNA 定量试剂；对应终体积为2 mL 的检测体系，检测 20 个样品，则需要在20 mL 1× TE 中加入100 μL PicoGreen dsDNA 定量试剂。由于试剂容易吸附到玻璃表 面，要在塑料容器中配制。PicoGreen 试剂见光易降解，因此要注意避光保存。

     溶液最好在配制好数小时内使用，以保证最佳结果。

实验方法 

1. 标准品工作液的配制： 

     Sigma 小牛胸腺嘧啶DNA 干粉1 mg（Tris，Nacl等浓度已成标准体系），加入1 mL 双蒸水，配制成1 mg/mL 的 标准液。

2. 染料工作液的配置： 

     5 μL PicoGreen 加入1 mL TE（注意：用1×TE将 PicoGreen 稀释200 倍，现用现配，注意避光）。

3. 标准液稀释： 

     （1）母液稀释：取10 μL（1 mg/mL）标准液加入到990μL TE 溶液中，稀释成10 μg/mL，取10 μL（10 μg/mL）标准液加 入到990 μL TE 溶液中，稀释成100 ng/mL。 

     （2）倍比稀释：取800 μL（100 ng/mL）的标准液加入到 200 μL TE 溶液中，浓度为80 ng/mL，取500 μL（80 ng/mL） 的标准液加入到500 μL TE溶液中，稀释到40 ng/mL；依次 倍比稀释，配成20 ng/ml、10 ng/ml、5.0 ng/ml、2.5 ng/ml. 

4. 标准曲线的制备：倍比稀释后的各梯度标准品溶液和染料工作液各取100 μL 混匀，避光室温放置5 min。使用FB-15 型便携式荧光仪检测样品的荧光值：将混合后的溶液加入微量比色皿，注意不要在样品中引入气泡，轻弹微量检测皿的 外部，可以驱散气泡。以1×TE 缓冲液为空白对照，测定样 品和空白对照的荧光值；或者直接用96 孔板进行荧光检测， 激发波长480 nm，发射波长520 nm，用标准品溶液的浓度 （ng/ml）对应的荧光强度作直线回归，制备标准曲线。

5. 测量待测样品的荧光值。根据制作的DNA 浓度的标准曲线，计算待测样品浓度。

注意事项

     1. 荧光染料均存在淬灭问题，请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭。 

     2. PicoGreen 工作液最好现配现用，以保证最佳结果。

     3. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。