琼脂糖凝胶 6B 是用 6%浓度琼脂糖制备成的球型颗粒，作为凝胶层析介质使用。

1 理化指标

              *检测条件： 层析柱 10mm×300mm *柱床高 5cm，25℃，流动相为 0.1mol/LNaCl。

2 贮存 

     产品应密封贮存在 4℃~25℃（保存溶液为 20%乙醇），通风、干燥、清洁的地方。不能冷冻。用过的柱子贮存在 4℃（20%乙醇），保质期：2 年。

3 应用 

     本产品为传统的琼脂糖介质，具有非特异性吸附低，回收率高，可多次重复使用等特点，用于分子量差异大、对分辨率要求不高的样品的凝胶层析纯化。

3.1 装柱 

     （1）让所有的材料和试剂均平衡至层析实验的温度。配制缓冲液，对所有的缓冲液进行脱气处理。 

     （2）检查层析柱所有部件，特别是过滤网，密封圈，螺旋塞是否紧密，玻璃管是否干净和完整。 

     （3）根据需要量取相应量的凝胶，用去离子水清洗掉 20%乙醇。 

     （4）将柱子底端用水或缓冲液润湿并保持一小段液位，务必使底端无气泡。 

     （5）用玻璃棒引导匀浆沿着柱内壁一次性倒入柱内，注意勿使产生气泡。打开柱子出液口，使凝胶在柱内自由沉降，连结好柱子顶端柱头。 

     （6）打开蠕动泵，让缓冲液用使用时流速的 1.33 倍的流速流过，使柱床稳定（注意压力不要超过填料最大耐压）。

3.2 平衡

     上样前平衡层析柱至少 5-10 个柱体积，直到记录仪基线变得平稳为止（流出液的 pH 值和电导值等 于上柱 Buffer 的 pH 值和电导值）。

3.3 上样 

     （1）样品用平衡液配制，样品一定要离心或过滤后上样（0.45um 滤膜），如果样品盐浓度太大，则 需要处理后再上样。 

     （2）推荐的上样量不超过柱体积的 5%。

3.4 洗脱 

     用缓冲液洗脱，洗脱中保持流速、缓冲液组成不变。

3.5 再生 

     一般用缓冲液洗到平衡，可再次使用。在一些应用中，诸如变性蛋白质或脂质体物质在再生过程中 洗脱不掉。出现下面这些情况，是必须需要清洗再生的： 

     （1）背压增加；

     （2）色谱柱顶部的颜色变化； 

     （3）分辨率降低； 

     （4）转换接头和凝胶表面之间出现空隙。 如果观察到压力增大，在开始柱清洁程序之前先检查管路中的各个过滤阀、过滤膜是否被污染，然 后通过用 0.1M NaOH 洗涤柱子，除去沉淀的蛋白质，非特异性结合的蛋白质和脂蛋白。

4 注意事项 

     （1）上样之前，样品必须经过膜过滤及去除色素，否则杂质及色素会被吸附到填料上，影响填料的正常使用。所有的缓冲液均需要用 0.45um 的过滤器过滤。 

     （2）在使用过程中，避免使用高浓度的强酸强碱，酸和碱的浓度应低于 0.1 摩尔。碱会使流速变慢。 

     （3）不同的样品，吸附和洗脱方法不相同，可以根据相关的文献进行。

5 产品订购相关信息