1 理化指标

                                                                          *HR 10/10 层析柱，5 cm 柱床高度

2 使用方法 

2.1 填料的准备 

     将干粉浸泡于纯水或缓冲液中，液体可以适当多加一些，室温下完全溶胀需 1-2 天，或者用 100℃纯水浸泡大约半个小时。完全溶胀后除去上清液以及上层少许漂浮物，用缓冲液彻底清洗填料。

2.2 装柱 

     （1）所有实验材料均需平衡至色谱层析操作的温度，所有的缓冲液进行脱气处理； 

     （2）检查层析柱所有部件，特别是过滤网，密封圈，螺旋塞是否紧密，玻璃管是否干净和完整。 

     （3）用去离子水清洗掉 20%乙醇保存液，用缓冲液配成匀浆。 

     （4）将柱子底端用水或缓冲液润湿并保持一小段液位，务必使底端无气泡。 

     （5）用玻璃棒引导匀浆沿着柱内壁一次性倒入柱内，注意勿使产生气泡。打开柱子出液口，使凝胶在柱内自由沉降，连结好柱子顶端柱头。 

     （6）打开蠕动泵，让缓冲液用使用时流速的 1.33 倍的流速流过，使柱床稳定（注意压力不要超过填料最大耐压）。

2.3 平衡柱子 

     用上样的平衡缓冲液平衡柱子后即可上样。（当流出液的 pH 和电导值与起始缓冲液相同时层析柱即完全平衡）。

2.4 上样

     样品应溶解在起始平衡缓冲液中，或者通过透析或脱盐的方法进行缓冲液置换，将样品缓冲液转移至起始平衡缓冲液。样品的粘度不应超过平衡缓冲液，上样前必须使用 0.45um 微孔滤膜对样品进行过滤。 

     最常见的程序是让目标分子结合到离子交换柱上，其他杂质流出。然而，在一些情况下，离子交换柱结合杂质而使目标分子流出，这样的操作也是可以的。

     对于目标分子的吸附，选择具有适当 pH 的缓冲液是至关重要的，请参考下表。

     缓冲液的离子强度应保持较低，以免干扰样品结合，推荐的操作 pH 应在缓冲液 pKa 的 0.5 个单位内， 并且和目标分子的等电点（pI）相差至少一个 pH 单位。

                                                         Buffers for anion exchange chromatography

2.5 洗脱

     对于 DEAE 葡聚糖凝胶和 QAE 葡聚糖凝胶填料，一般使用盐浓度递增或 pH 值递减（线性或者阶梯梯 度）的方式来进行洗脱。 

2.6 再生 

     根据样品的性质，通常通过用高离子强度洗脱缓冲液，如 2M NaCl 对柱子进行洗涤，或降低缓冲液pH，然后在平衡缓冲液中重新平衡来进行再生。在一些应用中，诸如变性蛋白质或脂质的物质在再生过 程中洗脱不下来，则需要通过在位清洗程序 CIP 来清除。

2.7 在位清洗（CIP） 

     通过用 5 倍柱床体积的 2M NaCl 溶液来除去结合的蛋白质。 

     通过用 2 倍柱床体积的 0.1M NaOH 溶液清洗填料，随后立即用大量纯水彻底清洗直至中性，从而除去沉淀的蛋白质、疏水结合的蛋白质和脂蛋白。 

3 保存 未使用的填料，请室温密闭保存.使用完的填料，用纯水彻底冲洗，用然后保存在 20%乙醇中，4℃保存，不能冷冻。 

4 注意事项 

     （1）上样之前，样品必须经过膜过滤及去除色素，否则杂质及色素会被吸附到填料上，影响填料的 正常使用。所有的缓冲液均需要用 0.45um 的过滤器过滤。 

     （2）在使用过程中，避免使用高浓度的强酸强碱，酸和碱的浓度应低于 0.1 摩尔。碱会使流速变慢。 

     （3）不同的样品，吸附和洗脱方法不相同，可以根据相关的文献进行。 

     （4）离子交换介质在选择层析柱时，避免使用细长柱，会增加实验操作压力。

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