1 简介

      金属螯合亲和层析介质，又称固定金属离子亲和色谱，其原理是利用蛋白质表面的一些氨基酸，如组 氨酸能与多种过渡金属离子如Cu2+，Zn2+，Ni2+，Co2+，Fe3+发生特殊的相互作用，能够吸附富含这类氨基 酸的蛋白质，从而达到分离纯化的目的。因此，偶联这些金属离子的琼脂糖凝胶就能够选择性地分离出这 些含有多个组氨酸的蛋白以及对金属离子有吸附作用的多肽、蛋白和核苷酸。一般来说，Ni2+是用于纯化 组氨酸标记的蛋白质的优选金属离子。半胱氨酸和色氨酸也能与固定金属离子结合，但这种结合力要远小 于组氨酸残基与金属离子的结合力。 镍亲和层析介质具有特异性好、流速快的优点，非常适合放大生产。

2 性能参数：

*检测条件： 层析柱 16mm×200mm *柱床高 5cm，25℃

3 使用方法 

      Ni-NTA琼脂糖凝胶6FF预先偶联Ni2+离子。通常，Ni2+是用于纯化重组组氨酸标签蛋白的优选金属离子， 用咪唑进行洗脱。 

      我们建议在含0.5-1.0 M NaCl的缓冲液，中性至弱碱性pH 7-8，这样的条件下结合，经常使用磷酸钠缓冲液。也可以使用Tris-HCl，但是在金属-蛋白质亲和力非常弱的情况下应该避免，因为它可以降低结合强度，在缓冲液中避免螯合剂如EDTA或柠檬酸盐的存在。

       如果重组组氨酸标签蛋白表达为包涵体，则在所有缓冲液中包括高达6M Gua-HCl或8M尿素。当使用 高浓度的尿素或Gua-HCl时，通常发生蛋白质解折叠。包涵体变性复性是个很复杂的过程，一般的建议纯 化可溶蛋白。 

提示：含有尿素的样品可以通过SDS-PAGE直接分析，而含有Gua-HCl的样品在SDS-PAGE之前必须用 尿素缓冲液置换缓冲液。

4 保存

使用完的填料，用纯水彻底冲洗，最后保存在 20%乙醇中，4℃保存。 

注意事项： 

1.上样之前，样品必须经过膜过滤及去除色素，否则杂质及色素会被吸附到填料上，影响填料的正常使用。 

2.在使用过程中，避免使用高浓度的强酸强碱，酸和碱的浓度应低于 0.1 摩尔。碱会使流速变慢。 

3.不同的样品，吸附和洗脱方法不相同，可以根据相关的文献进行。