一、 简介 

环氧活化琼脂糖凝胶是采用平均粒径为90μm的6%交联琼脂糖凝胶，表面用大分子糖链接枝，使它 有更高的比表面积和更好的生物兼容性，用它合成的亲和填料，避免蛋白之间位阻以及蛋白和填料的位 阻干扰，使其同等配基下有更高载量，同时具有更高的分辨率。由于比表面积大，平衡和洗脱的时间也 更短。即使是纯化病毒、抗体等生物大分子物质，载量也基本保持不变。

     产品特点： 

      1、偶联条件温和，偶联效率高。

      2、填料不需要处理，直接计算合适的量用于偶联，缩短时间。

      3、刚性强，流速快。 

      4、可偶联含有氨基、巯基、羟基的配基，应用范围广。

      5、偶联后制备的亲和填料寿命长，流速快，特异性高。

二、 填料特性： 

         基质 高度交联琼脂糖凝胶 

         适用范围 带氨基、巯基、羟基的物质（多糖，蛋白，核酸，抗体以及其他物质） 

         功能基团 epoxy 

         配基密度 15-30μmol/ml 

         平均粒径 90μm

         最大流速 200cm/h

三、操作步骤 

用环氧活化琼脂糖凝胶6B偶联牛血清白蛋白（BSA）为例： 

1、 取BSA 100mg溶解于10ml的pH9.0 0.25M碳酸钠缓冲液中； 

2、 用量筒量取环氧活化琼脂糖凝胶6B 5-6mL； 

3、 将凝胶加入溶解后的BSA溶液中混合，在摇床上振荡，25℃偶联6h； 

4、 然后加50mg甘氨酸，再反应6h，封闭剩余的基团。 

5、偶联了BSA的填料可以装在柱子中，然后用1M NaCl溶液洗10个柱床体积，收集装柱子的液体以 及清洗柱子的溶液测定BSA的总量，再用纯水冲10个柱床体积，最后将填料在20%乙醇溶液中保 存。如果是大量的偶联，可以选择G3砂心漏斗或者滤器上按上面的方法清洗，用20倍填料体积， 分3-5次清洗。 

6、BSA的偶联量为6 mg/mL。计算方法：BSA的吸附载量=（G0-G1）/V。 

     G0：BSA总使用量，单位：mg。

     G1：偶联反应后未偶联的BSA的量，单位：mg。  

      V ：填料的体积，单位：mL。  

     备注：该偶联方法可用于偶联单抗及其它蛋白，均能获得很好的偶联效果。  

环氧活化的填料的应用注意事项： 

1、活化的填料现取现用，以免时间过长造成偶联活性降低。如果要偶联的蛋白不稳定，可在摇床上 4℃振摇偶联12-16小时，以维持配基的活性。如果没有把握可以配相应浓度的配基溶液0.5-1ml，分别 选择不同pH及温度然后不加填料模拟偶联条件，到时间观察溶液是否有沉淀，如果有沉淀偶联效果就不 好，这时可以稍微降低pH或温度，同时可以加5%左右的甘油或PEG保护蛋白,避免沉淀，总之对于任何 配基最好能了解其溶解性及稳定性，避免实验失败导致损失。 

2、偶联配基后尽快清洗填料，避免在高pH条件中，配基失活。 

3、更稳定的配基可以直接溶解于NaOH溶液或者碳酸钠溶液中进行偶联，温度可适当提高，偶联时 间则相应缩短至1-4小时。 

4、偶联蛋白的最适pH为可以在8.0-10左右，在室温或4℃均可，温度与pH的提高均能增加配基的 吸附载量，根据蛋白的稳定选择合适的pH和温度，偶联蛋白溶液的浓度为5-20mg/ml。填料体积和配基 溶液的体积为1:1.5或者为1:2。 

5、偶联的缓冲液包括碳酸盐、硼酸盐和磷酸盐缓冲液，但绝对不能使用Tris、甘氨酸等含有氨基的 物质。

6、只能够用于体外实验，不能够用于临床、治疗和动物体内实验等，由此产生的后果，概不承担责 任。