应用范围：细胞膜荧光染料，主要用于细胞成像，细胞示踪和追踪

产品参数 

外观：可溶于 DMSO 的红色固体 

λEx/λ Em(MeOH) =491/613 nm 

CAS 号：114041-00-8 

分子式：C46H79IN2 

分子量：787 

分子结构图：

贮存条件 4℃ 避光保存，保质期 12 个月。

产品介绍 

DiA 是一种细胞膜绿色荧光染料，它在细胞膜中的扩散速度比 DiO 快，并且经常和 DiI 一起使用于细胞膜双色标记。

DiA 染色后可进行多聚甲醛（不可使用甲醇等其他试剂）的固定，但不建议在染色后进行透化的过程。此外，在固定透化（室温下用 0.1% TritonX-100 透化）后，也可以很好地进行质膜染色。DiA 对固定细胞的染色效果比 DiO 好。

使用方法 

1. 染色液制备

（1）配置无水 DMSO、无水 DMF 或 EtOH 储存液：储存液用无水 DMSO、无水 DMF 或 EtOH 配置浓度 1～5 mM。 DiO在DMSO和DMF中的溶解度比在EtOH中的溶解度高。

注：①未使用的储存液分装储存在-20℃，避免反复冻融。②发现较难溶解时可以适当加热，并用超声处理以促进溶解。

（2）工作液制备：用合适的缓冲液（如：无血清培养基，HBSS 或 PBS）稀释储存液，配制浓度为 1～30 μM 的工作液。最常用的工作液浓度为 5-10 μM。

注：工作液最终浓度建议根据不同细胞系和实验体系来优化。建议从推荐浓度的 10 倍范围内开始最优浓度的摸索。

2. 悬浮细胞染色 

（1）加入适当体积的染色工作液重悬细胞，使其密度为 1 ×106/mL。 

（2）37℃ 孵育细胞 2～20 min，不同的细胞最佳培养时间不同。可以 20 min 作为起始孵育时间，之后优化体系以得到均一的标记结果。 

（3）孵育结束，1000～1500 rpm 离心 5 min。倾倒上清液，再次缓慢加入 37℃预热的生长培养液重悬细胞。 

（4）重复步骤（3）两次以上。

3. 贴壁细胞的染色

（1）将贴壁细胞培养于无菌盖玻片上。 

（2）从培养基中移走盖玻片，吸走过量培养液，但表面要保持湿润。 

（3）在盖玻片的一角加入 100 μL 的染料工作液，轻轻晃动使染料均匀覆盖所有细胞。 

（4）37℃ 孵育细胞 2～20 min，不同的细胞最佳培养时间不同。可以 20 min 作为起始孵育时间，之后优化体系以得到均一的标记结果。 

（5）吸干染料工作液，用培养液洗盖玻片 2～3 次，每次用预温的培养基覆盖所有细胞，孵育 5～10 min，然后吸干培养基，但要使表面保持湿润。

4. 结果检测样品可在培养基中进行检测，可以通过荧光显微镜成像或流式细胞仪分析。

注意事项 

1. DiA 染色固定的细胞或组织样品时，样品宜使用配制在 PBS 中的 4% 多聚甲醛进行固定，使用其它不适当的固定液会导致荧光背景较高。 

2. 荧光染料均存在淬灭问题，请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭。 

3. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。